材料和方法

增儀上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司、超低溫冰箱 GL-9668FNUAIRE(美國(guó))、NucleoSpin96soil 試劑盒(德國(guó))、 MISEQ03IlluminaMiSeq 基因測(cè)序儀上海美吉生物醫(yī)藥科技有限 公司。2 操作要點(diǎn) 海南山蘭米酒選用優(yōu)質(zhì)的海南蘭山稻為原料；采用傳統(tǒng)的工 藝釀造方法經(jīng)過(guò)浸泡、蒸熟揉散成粒，再把用黎山特定植物和米 粉制成的“球餅”碾至粉狀摻入其中，然后放置在墊滿芭蕉葉的 錐形竹筐內(nèi)，上面也用芭蕉葉封蓋，一日后取少量冷水沁入并封 口埋到芭蕉樹(shù)下自然成酒。一年后，米、糟、葉均稀化成漿液， 故稱“山蘭玉液”、“瓊漿玉液”，被視為黎族的茅臺(tái)川三天后， 朝下的竹筐尖部開(kāi)始往置于筐下的陶土罐子里滴出漿水，得到山 蘭純液，呈乳白色。用無(wú)菌水稀釋至 1 ng/uL。以稀釋后的基因組 DNA 為模板，基因組測(cè)序由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司通過(guò) MiseqIllumina 平臺(tái)完成。增儀上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司、超低溫冰箱 GL-9668FNUAIRE(美國(guó))、NucleoSpin96soil 試劑盒(德國(guó))、 MISEQ03IlluminaMiSeq 基因測(cè)序儀上海美吉生物醫(yī)藥科技有限 公司。

結(jié)果與分析

整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中的優(yōu)勢(shì)微生物主要有 Firmicute(厚壁菌)，其次是 Proteobacteria(變形桿菌屬)，樣品 A 的 物種豐富度最低，樣品 B 的物種豐度最高,有除了以上兩種，還有 Bacteroidetes(擬桿菌)、Chloroflexi(綠灣菌)。說(shuō)明，在發(fā)酵過(guò)程中 初期的微生物種類比較少，主要受 Firmicute(厚壁菌)影響，發(fā)酵 中期的物種豐富度最高。這可能是由于變形菌門的一部分細(xì)菌為 好氧型，不能適應(yīng)米酒發(fā)酵過(guò)程中缺氧、產(chǎn)酸、產(chǎn)醇的環(huán)境，因 而豐度降低；而 Firmicute(厚壁菌)中的乳桿菌和乳球菌大多數(shù)為 厭氧細(xì)菌，能夠產(chǎn)酸且在高酸環(huán)境下生長(zhǎng)，所以整個(gè)過(guò)程中厚 壁菌屬數(shù)量變化不大。同時(shí)基于在 OTU 水平等級(jí)系數(shù)，對(duì)樣品中 的優(yōu)勢(shì)物種相關(guān)性進(jìn)行分析，則說(shuō)明在發(fā)酵的前 期和末期相似度較高，物種豐富度較低。

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