實(shí) 驗(yàn)

液體發(fā)酵培養(yǎng)基Ⅲ: 馬鈴薯葡萄糖液體 培養(yǎng)基( PD) 。 H1650Ｒ 型湘儀離心機(jī)，湖南湘儀公司。 JY－SPCT 型電泳槽，北京君意公司。 Y04S－ 3C 型凝膠成像系統(tǒng)，北京君意 公司。 YP* N 型電子天平，上海精密科學(xué)儀器 公司。 OSE－DB－ 02 型金屬浴，北京天根生化 公司。 VX100 型渦旋振蕩器，Labnet 公司。 小型離心機(jī)，BioExpress 公司。 OSE－GP－02 型 TGreat 梯度 PCＲ 儀( 96 模塊) ，北京天根生化公司。 HZQ－F160 型全溫振蕩培養(yǎng)箱，蘇州培 英公司。 DNP 電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海精宏公司。 LDZX－75XBS 型立式壓力蒸汽滅菌器， 上海申安器械廠。 SW－CJ 型潔凈工作臺(tái)，蘇州安太空氣技 術(shù)公司。。待平板上的桑黃組織萌發(fā)， 之后從菌落邊緣用接種針挑取新鮮菌絲進(jìn)一 步純化培養(yǎng)，直至單一菌落長(zhǎng)出，即為純菌。 將純菌接種 PDA 斜面培養(yǎng)基，28 ℃ 恒溫條 件下避光培養(yǎng)，待長(zhǎng)滿斜面后，將試管斜面轉(zhuǎn) 移到冰箱( 4 ℃ ) 中避光保存?zhèn)溆谩?/p>

結(jié)果與分析

基于分子生物學(xué)的菌種鑒定技術(shù)近年來 發(fā)展 迅 速，18 s rDNA 及 28 s rDNA 間 的 rDNA 內(nèi) 轉(zhuǎn) 錄 間 隔 區(qū) ( internal transcribed spacer，ITS) 序列分析技術(shù)被廣泛應(yīng)用于多種 真菌種屬水平的分類鑒定研究中。ITS 測(cè) 序分析具有測(cè)序方便、穩(wěn)定性好、進(jìn)化速率快 等優(yōu)點(diǎn)。研究首先對(duì) 9 株分離菌提取基因 組，以 此 DNA 為 模 板、ITS1 /ITS4 為 引 物， PCＲ 擴(kuò)增獲得 800 bp 左右的特異性擴(kuò)增片 段，送樣測(cè)序獲得 ITS 序列信息。利用 NCBI 數(shù)據(jù)庫對(duì) 9 株菌 ITS 序列在線 BLAST，利用 MEGAX 軟件，基于 Neighbor－joining 法構(gòu)建 系統(tǒng)發(fā)育樹并比較菌株之間的同源關(guān)系。結(jié)果表明，9 株菌均屬于纖孔菌 屬 ( lnonotus) 。SH－8 和 SH－ 9 與粗毛纖孔 菌 ( Inonotus hispidus KAＲ 1mLP1) 相似性最 高，序列相似性均在 99%以上，遺傳距離在 0． 01 以 內(nèi)。 其它菌株與粗毛纖 孔 菌 ( Inonotus hispidus BWB01) 相似性最高，序列 相似性均在 99%以上，遺傳距離在 0． 01 以 內(nèi)。綜上可知，從三份桑黃樣本中分離到的 菌株可歸為粗毛纖孔菌。包海鷹等系統(tǒng) 分析了古書中關(guān)于桑黃生境、子實(shí)體特征、藥 用功效，認(rèn)為粗毛纖孔菌最符合“桑黃”的特 點(diǎn)。這與研究結(jié)果相符合。

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