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        上海精宏

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        大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體表達(dá)的影響分析(D

        返回列表 來(lái)源:未知 發(fā)布日期:2019-12-11 09:10【

        子宮內(nèi)膜異位癥( endometriosis,EMs) 是婦科常 見(jiàn)疾病,而疼痛是 EMs 突出的臨床癥狀之一,主要 表現(xiàn)為痛經(jīng)、性交痛和慢性盆腔痛等。據(jù)報(bào)道,15 ~ 49 歲女性 EMs 的患病率為 0.1%。我們根據(jù)多年 臨床經(jīng)驗(yàn),認(rèn)為“濕”“熱”“瘀”并存且互為因果是 導(dǎo)致 EMs 反復(fù)疼痛、纏綿難愈的主要病理機(jī)制,故 采用活血化瘀、清熱利濕法,并擬定盆痛靈方治療 EMs,臨床療效顯著。前期研究證實(shí),盆痛靈方能 提高小鼠痛閾,且對(duì) EMs 模型大鼠的治療作用可 能與降低腹腔液神經(jīng)生長(zhǎng)因子( nerve growth factor, NGF) 水平有關(guān)。


        1 材料與方法


         1.1 實(shí)驗(yàn)材料


         1.1.1 動(dòng)物 


        SD 大鼠,雌性,SPF 級(jí),體質(zhì)量( 180± 20) g,購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,合格 證號(hào): SCXK( 滬) 2014-0016。所有動(dòng)物均飼養(yǎng)于上 海中醫(yī) 藥 大 學(xué) 實(shí) 驗(yàn) 動(dòng) 物 中 心,飼 養(yǎng) 室 溫 度 20 ~ 26 ℃,相對(duì)濕度 40% ~ 70%,光照時(shí)間 12 h,可自由 飲食。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格遵守上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物倫理委員會(huì)的要求。 


        1.1.2 藥物與試劑 


        盆痛靈方由三棱、莪術(shù)、延胡索、川楝子和虎杖組成,水煎劑由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院提供,臨用前稀釋至所需濃度。消炎痛片,湖北東信藥業(yè)有限公司產(chǎn)品( 規(guī)格: 25 mg / 片,批準(zhǔn)文號(hào): 國(guó)藥準(zhǔn)字 H42021462) ,臨用前配制成 0.3 mg /ml 混懸液。


        1.1.3 主要儀器


        DHG-9053A 電熱鼓風(fēng)干燥箱,嘉興市中新醫(yī)療儀器有限公司; 精宏DNP9082 恒溫孵育箱,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司; BX53 顯微鏡,日 本 Olympus 公 司; Light Cycler  96 實(shí) 時(shí) 熒 光 定 量 PCR 儀,瑞士 Roche 公司; Tissuelyser-24 多樣品組 織碾 磨 器,上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司; MIKRO220R 低溫高速離心機(jī),德國(guó) Hettich 公司; MK3 酶標(biāo)儀,美國(guó) Thermo 公司; EPS 300 電泳儀、 VE 186 轉(zhuǎn) 移 電 泳 槽,上海天能科技有限公司; ChemiQ 4600 化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng),上海勤翔科學(xué)儀 器有限公司。


        1.2 造模方法 


        參照?qǐng)?bào)道,采用大鼠自體內(nèi) 膜種植的方法建立 EMs 模型。假手術(shù)組大鼠開(kāi)腹 后結(jié)扎一側(cè)子宮,將結(jié)扎段子宮剪除后關(guān)腹。造模 2 周后開(kāi)腹檢查,移植處形成突起且內(nèi)含積液,視為 造模成功。


         1.3 分組與干預(yù) 


        取造模成功的大鼠 50 只,隨機(jī) 分為模型組、消炎痛組及盆痛靈低、中、高劑量組, 每組 10 只; 另設(shè)假手術(shù)組 10 只。消炎痛組大鼠給 予 3 mg·kg-1 ·d-1 消炎痛混懸液,盆痛靈低、中、高 劑量組大鼠分別給予 10. 2、20. 4 ( 臨 床 等 效 量) 、 40.8 g·kg-1 ·d-1 盆痛靈方水煎液,各組均采用直腸 給藥方式,每日 1 次,連續(xù) 4 周; 模型組和假手術(shù)組 給予等體積 0.9%NaCl 溶液。末次給藥后,采集各組大鼠的子宮內(nèi)膜組織。


        2 結(jié)果 


        NGF 及其受體 mRNA 表達(dá)的 影響 與假手術(shù)組相比,模型組大鼠子宮內(nèi)膜組織 NGF、TrkA、p75NTR 的 mRNA 表 達(dá) 顯 著 升 高 ( P<0.01) 。與模型組相比,消炎痛組和盆痛靈中、 高劑量 組 NGF 和 TrkA 的 mRNA 表 達(dá) 明 顯 降 低 ( P<0.05,P<0.01) ,消炎痛組和盆痛靈高劑量組 p75NTR 的 mRNA 表達(dá)亦明顯下調(diào)( P<0.01) 。盆痛 靈低劑量組與模型組的各項(xiàng) mRNA 表達(dá)比較,差異 均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P>0.05) ; 消炎痛組與盆痛靈高劑 量組的各項(xiàng) mRNA 表達(dá)比較,差異亦均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義( P>0.05) 。 與盆痛靈低劑量組相比,高劑量組大鼠子宮內(nèi) 膜組織 NGF、TrkA、p75NTR 的 mRNA 表達(dá)均顯著降 低( P<0.01) ,中劑量組 TrkA mRNA 表達(dá)亦明顯降 低( P<0.05) ; 與盆痛靈中劑量組相比,高 劑 量 組 p75NTR mRNA 表達(dá)明顯下調(diào)( P<0.01) 。與假手術(shù)組相比,模型組與 盆痛靈低劑量組 NGF 及其受體 p75NTR、TrkA 高表 達(dá)于異位內(nèi)膜組織的腺上皮細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞胞漿, 少量表達(dá)于胞核。與模型組相比,消炎痛組及盆痛 靈中、高劑量組 NGF 及其受體 p75NTR、TrkA 的陽(yáng) 性表達(dá)明顯減弱。與盆痛靈低劑量組相比,中、高 劑量組 NGF 及其受體 p75NTR、TrkA 的陽(yáng)性表達(dá)明 顯減弱。


        3 討論 


        EMs 病因尚不明確,且缺少能完全治愈的藥 物,而停藥后又易于復(fù)發(fā)、疼痛難愈,嚴(yán)重影響患者 的生活質(zhì)量。NGF 是一種能夠刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)的 活性多肽,在傷害性感受器的功能調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵性 作用。本研究表明,異位內(nèi)膜種植后,內(nèi)異灶 NGF 的 mRNA 和蛋白表達(dá)水平顯著升高; 前期研究發(fā)現(xiàn) 內(nèi)異灶周?chē)母骨灰褐?NGF 和炎癥因子 IL-1β、 TNF-α 含量增多,推測(cè)異位內(nèi)膜組織的形成促使病 灶局部及周?chē)?xì)胞釋放 NGF 及炎癥因子。內(nèi)異 灶中的 NGF 可激活肥大細(xì)胞,使其在內(nèi)異灶中脫顆 粒釋放 IL-1β、TNF-α 等炎癥因子。當(dāng)表達(dá) IL-1β 的 內(nèi)膜隨經(jīng)血逆流至腹腔后,腹腔內(nèi)會(huì)產(chǎn)生高濃度 IL-1β并激活巨噬細(xì)胞分泌 TNF-α,共同誘導(dǎo)病灶周 圍形成炎癥狀態(tài)。這說(shuō)明病灶周?chē)喾N炎癥介 質(zhì)過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致的免疫炎癥環(huán)境與病灶中 NGF 異 常表達(dá)高度相關(guān)。





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