子宮內(nèi)膜異位癥( endometriosis，EMs) 是婦科常 見疾病，而疼痛是 EMs 突出的臨床癥狀之一，主要 表現(xiàn)為痛經(jīng)、性交痛和慢性盆腔痛等。據(jù)報(bào)道，15 ～ 49 歲女性 EMs 的患病率為 0．1%。我們根據(jù)多年 臨床經(jīng)驗(yàn)，認(rèn)為“濕”“熱”“瘀”并存且互為因果是 導(dǎo)致 EMs 反復(fù)疼痛、纏綿難愈的主要病理機(jī)制，故 采用活血化瘀、清熱利濕法，并擬定盆痛靈方治療 EMs，臨床療效顯著。前期研究證實(shí)，盆痛靈方能 提高小鼠痛閾，且對(duì) EMs 模型大鼠的治療作用可 能與降低腹腔液神經(jīng)生長(zhǎng)因子( nerve growth factor， NGF) 水平有關(guān)。

1 材料與方法

 1．1 實(shí)驗(yàn)材料

 1．1．1 動(dòng)物 

SD 大鼠，雌性，SPF 級(jí)，體質(zhì)量( 180± 20) g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格 證號(hào): SCXK( 滬) 2014-0016。所有動(dòng)物均飼養(yǎng)于上 海中醫(yī) 藥 大 學(xué) 實(shí) 驗(yàn) 動(dòng) 物 中 心，飼 養(yǎng) 室 溫 度 20 ～ 26 ℃，相對(duì)濕度 40% ～ 70%，光照時(shí)間 12 h，可自由 飲食。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格遵守上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物倫理委員會(huì)的要求。 

1．1．2 藥物與試劑 

盆痛靈方由三棱、莪術(shù)、延胡索、川楝子和虎杖組成，水煎劑由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院提供，臨用前稀釋至所需濃度。消炎痛片，湖北東信藥業(yè)有限公司產(chǎn)品( 規(guī)格: 25 mg / 片，批準(zhǔn)文號(hào): 國藥準(zhǔn)字 H42021462) ，臨用前配制成 0．3 mg /ml 混懸液。

1．1．3 主要儀器

DHG-9053A 電熱鼓風(fēng)干燥箱，嘉興市中新醫(yī)療儀器有限公司; 精宏DNP9082 恒溫孵育箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司; BX53 顯微鏡，日 本 Olympus 公 司; Light Cycler  96 實(shí) 時(shí) 熒 光 定 量 PCＲ 儀，瑞士 Ｒoche 公司; Tissuelyser-24 多樣品組 織碾 磨 器，上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司; MIKＲO220Ｒ 低溫高速離心機(jī)，德國 Hettich 公司; MK3 酶標(biāo)儀，美國 Thermo 公司; EPS 300 電泳儀、 VE 186 轉(zhuǎn) 移 電 泳 槽，上海天能科技有限公司; ChemiQ 4600 化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)，上海勤翔科學(xué)儀 器有限公司。

1．2 造模方法 

參照?qǐng)?bào)道，采用大鼠自體內(nèi) 膜種植的方法建立 EMs 模型。假手術(shù)組大鼠開腹 后結(jié)扎一側(cè)子宮，將結(jié)扎段子宮剪除后關(guān)腹。造模 2 周后開腹檢查，移植處形成突起且內(nèi)含積液，視為 造模成功。

 1．3 分組與干預(yù) 

取造模成功的大鼠 50 只，隨機(jī) 分為模型組、消炎痛組及盆痛靈低、中、高劑量組， 每組 10 只; 另設(shè)假手術(shù)組 10 只。消炎痛組大鼠給 予 3 mg·kg－1 ·d－1 消炎痛混懸液，盆痛靈低、中、高 劑量組大鼠分別給予 10． 2、20． 4 ( 臨 床 等 效 量) 、 40．8 g·kg－1 ·d－1 盆痛靈方水煎液，各組均采用直腸 給藥方式，每日 1 次，連續(xù) 4 周; 模型組和假手術(shù)組 給予等體積 0．9%NaCl 溶液。末次給藥后，采集各組大鼠的子宮內(nèi)膜組織。

2 結(jié)果 

NGF 及其受體 mＲNA 表達(dá)的 影響 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠子宮內(nèi)膜組織 NGF、TrkA、p75NTＲ 的 mＲNA 表 達(dá) 顯 著 升 高 ( P＜0．01) 。與模型組相比，消炎痛組和盆痛靈中、 高劑量 組 NGF 和 TrkA 的 mＲNA 表 達(dá) 明 顯 降 低 ( P＜0．05，P＜0．01) ，消炎痛組和盆痛靈高劑量組 p75NTＲ 的 mＲNA 表達(dá)亦明顯下調(diào)( P＜0．01) 。盆痛 靈低劑量組與模型組的各項(xiàng) mＲNA 表達(dá)比較，差異 均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P＞0．05) ; 消炎痛組與盆痛靈高劑 量組的各項(xiàng) mＲNA 表達(dá)比較，差異亦均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義( P＞0．05) 。 與盆痛靈低劑量組相比，高劑量組大鼠子宮內(nèi) 膜組織 NGF、TrkA、p75NTＲ 的 mＲNA 表達(dá)均顯著降 低( P＜0．01) ，中劑量組 TrkA mＲNA 表達(dá)亦明顯降 低( P＜0．05) ; 與盆痛靈中劑量組相比，高 劑 量 組 p75NTＲ mＲNA 表達(dá)明顯下調(diào)( P＜0．01) 。與假手術(shù)組相比，模型組與 盆痛靈低劑量組 NGF 及其受體 p75NTＲ、TrkA 高表 達(dá)于異位內(nèi)膜組織的腺上皮細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞胞漿， 少量表達(dá)于胞核。與模型組相比，消炎痛組及盆痛 靈中、高劑量組 NGF 及其受體 p75NTＲ、TrkA 的陽 性表達(dá)明顯減弱。與盆痛靈低劑量組相比，中、高 劑量組 NGF 及其受體 p75NTＲ、TrkA 的陽性表達(dá)明 顯減弱。

3 討論 

EMs 病因尚不明確，且缺少能完全治愈的藥 物，而停藥后又易于復(fù)發(fā)、疼痛難愈，嚴(yán)重影響患者 的生活質(zhì)量。NGF 是一種能夠刺激神經(jīng)元生長(zhǎng)的 活性多肽，在傷害性感受器的功能調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵性 作用。本研究表明，異位內(nèi)膜種植后，內(nèi)異灶 NGF 的 mＲNA 和蛋白表達(dá)水平顯著升高; 前期研究發(fā)現(xiàn) 內(nèi)異灶周圍的腹腔液中 NGF 和炎癥因子 IL-1β、 TNF-α 含量增多，推測(cè)異位內(nèi)膜組織的形成促使病 灶局部及周圍細(xì)胞釋放 NGF 及炎癥因子。內(nèi)異 灶中的 NGF 可激活肥大細(xì)胞，使其在內(nèi)異灶中脫顆 粒釋放 IL-1β、TNF-α 等炎癥因子。當(dāng)表達(dá) IL-1β 的 內(nèi)膜隨經(jīng)血逆流至腹腔后，腹腔內(nèi)會(huì)產(chǎn)生高濃度 IL-1β并激活巨噬細(xì)胞分泌 TNF-α，共同誘導(dǎo)病灶周 圍形成炎癥狀態(tài)。這說明病灶周圍多種炎癥介 質(zhì)過度表達(dá)導(dǎo)致的免疫炎癥環(huán)境與病灶中 NGF 異 常表達(dá)高度相關(guān)。

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